常見的RNA提取的方法：傳統的酚CHCl?抽提法和柱式抽提法。

操作流程概要

酚CHCl?抽提法

以 Vazyme 產品 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent (Vazyme #R401) 為例

自備材料

CHCl?，異丙醇，75% 乙醇 (DEPC 水配制 )，DEPC 水

組分

                                                                                                                                                                                                         

樣本制備（過多的樣本量可能會導致樣本裂解不充分，并使產物純度降低；）

1ml RNA is olater 能夠充分裂解的最大樣本量如下：                                                                                                                                                                                                                                                                  

貼壁細胞（對于貼壁牢固的細胞可用細胞刮勺剝離細胞）

1.棄培養液，PBS 洗滌一次。

2.每 10 cm2 培養面積的細胞加入 1-3 ml RNA isolater，使之充分覆蓋到細胞表面，

然后用移液器將細胞吹打下來。

3.將裂解液轉移至 1.5 ml 離心管中，用移液器反復吹打直至無明顯顆粒樣存在。

冰上靜置 5 min

懸浮細胞

1、離心收集細胞，PBS 洗滌一次。

2、每 5 ⅹ 106 -107 個細胞加入 1 ml RNA isolater。

3、用移液器反復吹打直至無明顯顆粒樣存在。冰上靜置 5 min。

動物組織

液氮研磨（部分研磨會影響 RNA 的得率和質量）：

1、將液氮研磨的粉末立即轉移至離心管中，加入 RNA isolater 裂解液，靜置。待樣品全部融化后，再繼續吹打至裂解液透明。

2、將裂解液轉移至離心管中，12,000 × g 4℃離心 5 min，吸取上清。

勻漿處理：

1、可將新鮮組織盡量剪碎浸泡在 RNA isolater 裂解液中，用電動勻漿器高速勻漿，將組織全部研磨均勻。

2、將裂解液轉移至離心管中，12,000 × g 4℃離心 5 min，吸取上清。

提取流程        
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                   

柱式抽提法

以 Vazyme 產品 FastPureTM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit (Vazyme #RC101/RC111) 為例

自備材料

組分

β- 巰基乙醇、無水乙醇、RNase-free 槍頭等。

培養細胞

貼壁細胞：

無需消化，可直接使用 Buffer RL1( 已加入 β- 巰基乙醇 ) 進行消化、裂解；或用胰酶消化后離心收集細胞加入 Buffer RL1( 已加入 β- 巰基乙醇 )，每 2-5×106 個細胞加入 500 μl Buffer RL1。用移液器反復吹打混勻直至看不到細胞團塊。（使用前在 Buffer RL1 加入 β- 巰基乙醇至終濃度為 1%（如1 ml Buffer RL1 中加入 10 μl β- 巰基乙醇），盡量現配現用）

懸浮細胞：

直接離心收集細胞，加入 Buffer RL1( 已加入 β- 巰基乙醇 )，每 2-5×106 個細胞加入 500 μl Buffer RL1，用移液器反復吹打混勻直至看不見細胞團塊。（每 2-5×106 個細胞加入 500 μl Buffer RL1，細胞裂解完后若不立即進行下一步操作，可以置于 -70℃、保存）

提取流程

相關產品

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務